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食用菌母种制作

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食用菌母种制作

发布日期:2016-10-20 作者: 点击:

  一、目的要求
了解食用菌母种培养基的配方,熟悉母种培养基(PDA或PSA)的配制方法,了解高压蒸汽灭菌锅的构造,掌握正确使用高压蒸汽灭锅的方法.熟悉接种箱的消毒灭菌方法,掌握食用菌母种转管技术。
二、实训准备
(1)配制培养基材料:马铃薯,葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、水等。
(2)仪器用具:高压蒸汽灭菌锅(手提式或立式),可调式电炉,铝锅(20cm),汤勺,切刀,切板,量杯,纱布,漏斗(带胶管和玻璃管),止水夹,漏斗架,试管(18mm×180mm或20mm×200mm),1cm厚的长方形木条(摆放斜面时垫试管用),棉花(未脱脂),捆扎绳,标签,天平等。
(3)消毒灭菌药品及设备:高锰酸钾,37%甲醛溶液,坩埚或烧杯,紫外灯,0.25%新洁尔灭溶液,5%石炭酸溶液,喷雾器等。
(4)转管材料及用具:平菇试管母各,接种箱,接种铲,酒精灯,火柴,95%酒精,75%酒精棉球,肥皂等。
三,方法步骤
(1)母种培养基(PDA或PSA)配方:马铃薯200g,葡萄糖(或蔗糖)20g,琼脂15~20g,水1000ml,PH自然。
(2)母种培养基的配制
熬制:先将马铃薯洗净,挖芽去皮,准确称取200g,然后将马铃薯切成玉米大小的颗粒或薄片。用量杯量取1000~1200ml水于铝锅内煮马铃薯,待水沸后计时20~25min,当马铃薯酥而不烂时,用双层纱布进行过滤于量杯中,洗净铝锅滤渣,将滤液到回锅中继续以文火加热,加入葡萄糖(或蔗糖)和琼脂,待琼脂溶化,不断搅拌,以免糊锅,注意补足水量。
分装:将熬成的培养基保持文火,趁热分装:用勺将培养基加入漏斗中,左手握2~5支试管,右手持漏斗下面的玻璃管入试管口内,同时放开止水夹,让培养基逐个流入试管内,培养基高度约为试管长度的1/6~1/5,约10~15ml,注意避免将培养基沾于试管口内外。分装后的试管,在培养基凝固前必须立放。 制棉塞:用叠放式将未脱脂棉做成棉球,塞入试管口,管口内棉塞底部要求光滑,棉塞侧面要求无褶皱,棉塞长度的2/3在管口内,1/3在管口外。棉塞的松紧以手提棉塞轻晃试管不滑出为度,捆把:以10支试管为一捆,用捆扎绳扎紧。贴上标签,准备灭菌。
(3)培养基的灭菌
手提式高压灭菌锅的构造:锅体,提把,压力表,安全阀,排气阀,灭菌锅腔,筛架,锅盖,胶垫圈,紧固螺栓等。 高压灭菌锅的使用方法:加水→灭菌物入锅→上盖→对称,均匀地扭紧螺栓→加热升温→压力至0.5kg/cm2时,打开排气阀排除锅内冷空气,压力降至0,温度达到121℃时,开始调火稳压25~30min→灭火,自然降压到压力为0.5kg/cm2,可慢慢批开排气阀徐徐降压至0(若降压太快,试管中的培养基易沸腾浸湿棉塞)→锅盖半开,让锅内多余蒸汽逸出,锅内的余热烘干棉塞→开盖,取物→摆斜面→斜面试管上应覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布,防止试管内产生过多的冷凝水。 接种箱的消毒灭菌药物消毒:首先用0.25%新洁尔灭溶液擦净接种箱内外.再用5%石炭酸溶液进行接种箱内的喷雾。 熏蒸杀菌:在坩埚或烧杯里倒放37%甲醛溶液10ml/m3,放进接种箱内,再通过接种箱的侧门在甲醛溶液加入高锰酸钾5~8g.甲醛溶液与高锰酸钾发生强烈的氧化还原反应,立即沸腾并挥发出有强烈刺激的气体,其中产生的原子氧有较强的杀菌作用。 紫外线灯照射:接种箱的顶部安装一根30~40W紫外灯,在接种箱玻璃外面覆盖一层牛皮纸或几层报纸有机木耳,压缩秋木耳,食用菌厂家,黑暗中开灯照射才能才能增加杀菌效果,紫外灯照射1h后关灯,待臭氧散后可开始接种。
(4)食用菌母种转管技术
手及试管的表面消毒:先用肥皂洗手,在用0.25%新洁尔灭溶液浸泡手2min,或以75%酒精棉球擦手和试管表面(包括母种试管和待接种的斜面试管)。在接种箱外的酒精灯的火焰上燃烧试管外的棉塞,即用手捂灭火焰,立即将试管放入接种箱内。
菌种移接(转管)方法:两手从接种孔伸入接种箱内,左手持母种管和斜面管并排于拇指和食指间,拇指在上,食指在下。注意两支试管口对齐于火焰上方,右手持接种铲,用手背指缝拔掉试管棉塞,使棉塞底部朝外,将接种铲先蘸取95%酒精,后在火焰中烧灼接种铲的前段,待冷却后伸入母管内切取一小块带有培养基的菌种块,迅速移入斜面培养基的中部,菌丝朝上。然后,将右手指缝夹住的棉塞底部及周围在火焰上烧一下,立即塞入试管口,旋紧棉塞。再换上第二支斜面试管,重复如上操作,注意,菌种移接的整个过程的动作要求做到"快","准",接种铲不要触碰管口及管壁。接种后的试管应立即巾标签,写上菌号及日期,进行适温培养。 结束工作:菌种移接完毕,将酒精灯盖灭,95%酒精瓶盖上,然后,批开侧门,取出试管,将接种箱的汽水擦干,清除箱内的残留物,将酒精灯,酒精瓶,接种铲等用具摆放整齐。


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